為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。

1.產(chǎn)品介紹

EAH Focurose 4FF是將己二胺共價偶聯(lián)到瓊脂糖基質(zhì)上制得的快流速純化介質(zhì)。它在間隔臂末端含有氨基，主要適用于偶聯(lián)含有自由羧基的小分子化合物（配基）制作親和純化介質(zhì)。

偶聯(lián)反應需要在酸性條件下（酸催化）進行，加入偶聯(lián)試劑（碳化二亞胺，例如EDC、CMC）可以促進游離氨基和游離羧基的縮合。

特點：

a.應用廣泛，可適用于偶聯(lián)含羧基的小分子化合物。

b.單點偶聯(lián)，易于控制。

c.流速快、產(chǎn)率高、易于放大。

表1：介質(zhì)性能參數(shù)

*:穩(wěn)定性取決于偶聯(lián)的配基

2.溶液制備

A液：0.0001M HCl。

B液：0.5M NaCl。

C液：0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl，pH 8.3。

D液：0.1M 乙酸鈉、0.5M NaCl，pH 4.0。

E液：20%乙醇。

F液：0.02M Na2HPO4、0.5M NaCl， pH 7.0-7.4。

G液：0.1M Glycine-HCl，pH 2.7。

H液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0。

3.樣品制備

3.1按50umol/ml的濃度將待偶聯(lián)樣品溶解在A液中，加入EDC或CMC至終濃度為0.1M，調(diào)整pH至4.5。

3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用   0.8μm過濾）。

4.偶聯(lián)流程

4.1取所需量的介質(zhì)勻漿液至相應規(guī)格的砂芯漏斗中抽干。

4.2加入2倍介質(zhì)體積的A液，攪拌均勻后抽干；重復2次。

4.3加入2倍介質(zhì)體積的B液，攪拌均勻后抽干；重復2次。

4.4將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應規(guī)格的反應器中。

4.5將待偶聯(lián)樣品加入到反應器中，室溫條件下溫和攪拌約24h(反應前期pH會發(fā)生變化，需要調(diào)節(jié)pH至4.5)。

4.6將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到砂芯漏斗中抽干，保存收集容器中偶聯(lián)后的溶液。

4.6加入2倍介質(zhì)體積的C液，攪拌均勻后抽干。

4.7加入2倍介質(zhì)體積的D液, 攪拌均勻后抽干。

4.8重復“4.6-4.7”2次。

4.9加入2倍介質(zhì)體積的E液, 攪拌均勻后抽干；重復2次。

4.10將介質(zhì)轉(zhuǎn)移到相應規(guī)格的容器中，加入等體積的E液后保存?zhèn)溆谩?/span>

5.偶聯(lián)效率測定

5.1測定偶聯(lián)前后溶液中樣品含量（A280或其它含量測定方法），計算偶聯(lián)效率。

6.純化流程（以XK16/10為例）

6.1采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

6.2用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

6.3用F液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.4將樣品以5ml/min的流速上樣。

6.5用F液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個CV）。

6.6用G液以5ml/min的流速洗脫10CV。

6.7用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

6.8用E液以5ml/min的流速沖洗5個CV。

7.清洗（取決于待偶聯(lián)樣品的穩(wěn)定性）

7.1用6M鹽酸胍沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。

7.2用70%乙醇沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。

7.3用F液沖洗10CV。

8.常見問題

表2：常見問題及解決方案

9.訂購信息

表3：訂購信息表

備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。