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產(chǎn)品展示

arProtein A Focurose HR

價(jià) 格:詢價(jià)

規(guī) 格:25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

產(chǎn) 地:中國

貨 號(hào):HQ320827001L

品 牌:匯研生物


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產(chǎn)品概述

  為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作,使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀本手冊(cè),有任何疑問請(qǐng)咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員(聯(lián)系方式見附錄)。


1.產(chǎn)品介紹

arProtein A Focurose HR適用于分離純化腹水、細(xì)胞培養(yǎng)上清、血清來源的單抗、多抗及Fc標(biāo)簽蛋白等。

特點(diǎn):

a.快速、簡單(一步純化)。

b.載量高、流速快、易于放大。

c.與Protein G相比,結(jié)合力相對(duì)較弱,更容易洗脫,也能更好的維持抗體的滴度(見表2)。

 

表1:介質(zhì)性能參數(shù)

基質(zhì)

高剛性瓊脂糖

粒徑范圍

45-165μm

平均粒徑

70±5μm

結(jié)合載量

≥50mg(人IgG)/ml(介質(zhì))

pH穩(wěn)定性

3-9(長期)

2-10(短期)

化學(xué)穩(wěn)定性

所有常用緩沖溶液中穩(wěn)定

70%乙醇、6M鹽酸胍(8天),0.5M 氫氧化鈉(2天)

流速

≦500cm/h

操作壓力

≤0.5MPa

貯存溶液

20%乙醇

貯存溫度

4-8℃

備注:

1.介質(zhì)的結(jié)合載量會(huì)因樣本的來源和亞型的變化而變化。

2.介質(zhì)如果長時(shí)間浸泡在洗脫液中,會(huì)導(dǎo)致配基水解,最終影響介質(zhì)載量。

表2:Protein A和 Protein G與不同種屬IgG的結(jié)合強(qiáng)度

種類

亞類

Protein A

Protein G

IgA

可變

-

IgD

-

-

IgE

-

-

IgG1

++++

++++

IgG2

++++

++++

IgG3

-

++++

IgG4

++++

++++

IgM

可變

-

豚鼠

IgG1

++++

++

IgG2

++++

++

倉鼠

/

+

++

小鼠

IgG1

+

++++

IgG2a

++++

++++

IgG2b

+++

+++

IgG3

++

+++

IgM

可變

-

大鼠

IgG1

-

+

IgG2a

-

++++

IgG2b

-

++

IgG3

+

++

/

++++

+++

禽蛋黃

IgY

-

-

/

++

+

/

+++

+++

/

++

++++

/

++

++++

綿羊

/

-/+

++

山羊

/

-

++

猴子

/

++++

++++

駱駝

/

-

+

/

-

+

“-”:不結(jié)合

“+”:弱結(jié)合

“++”:結(jié)合

“+++”:中等結(jié)合

“++++”:強(qiáng)結(jié)合

 

2.溶液制備

平衡液:0.02M PB、0.15M NaCl, pH 7.0-7.4。

洗脫液:0.1M 檸檬酸緩沖液,pH 3.0。

中和液:1.0M Tris-HCl,pH 9.0。

 

3.樣品制備

3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液進(jìn)行裂解、透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。

3.2樣品過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用   0.8μm過濾)。

 

4.純化流程(以XK16/10為例)

4.1采用液滴對(duì)液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

4.2用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

4.3用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗10個(gè)CV。

4.4將樣品以5ml/min的流速上樣。

4.5用平衡液以5ml/min的流速?zèng)_洗至紫外吸收值平穩(wěn)(10-15個(gè)CV)。

4.6用洗脫液以5ml/min的流速洗脫10CV。

4.7用純化水以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

4.8用20%乙醇以5ml/min的流速?zèng)_洗5個(gè)CV。

 

5.清洗

5.1用O.1M NaOH緩慢沖洗不低于5CV

5.2用純化水沖洗至pH中性。 

5.4用20%乙醇沖洗3CV,4℃保存。

 

6.常見問題

表3:常見問題及解決方案

問題

可能原因

解決方案

純化時(shí)目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合

或結(jié)合量較低

1.上樣量過載

降低上樣量

2.上樣流速過快

降低上樣流速

3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集

及時(shí)有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì)

4.目標(biāo)物和介質(zhì)結(jié)合力弱

確認(rèn)IgG來源及亞型,選擇正確的介質(zhì)

5.純化時(shí)選擇的緩沖液不合適

確認(rèn)樣本中的pH,結(jié)合力弱的目標(biāo)物可以通過調(diào)高pH(8-9)和增加鹽濃度(1-3M NaCl)來提高樣本和介質(zhì)的結(jié)合力

洗脫時(shí)沒有收集到目標(biāo)物

或只收集到少量目標(biāo)物

1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少

先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合

2.洗脫條件不合適

降低洗脫液pH至2.5-3.0

3.洗脫時(shí)間不夠

降低流速,延長洗脫液的保留時(shí)間

4.洗脫體積過小

加大洗脫體積

目標(biāo)物純度較低

 

1.樣品沒有經(jīng)過前處理

根據(jù)樣品的來源,上柱前必須要經(jīng)過離心、過濾或稀釋

2.樣品粘度過高

用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?,降低樣品粘度和濃度?/span>

3.洗雜不徹底

加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致

4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀

及時(shí)有效地清洗介質(zhì)

5.目標(biāo)物出現(xiàn)降解

注意樣本純化前后的保存條件,不得在高溫、過酸、過堿條件長時(shí)間放置

6.柱料裝填效果不佳

重新裝填或購買

7.分離柱頂部有較大儲(chǔ)樣體積

重新裝柱或降低儲(chǔ)樣體積

8.介質(zhì)中有微生物生長

介質(zhì)使用完后,請(qǐng)及時(shí)正確保存介質(zhì)

介質(zhì)載量下降

1.上樣流速過快

降低上樣流速

2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集,導(dǎo)致載量下降

及時(shí)清洗介質(zhì)

3.使用次數(shù)過多,配基逐漸脫落

更換新介質(zhì)

色譜峰上升過陡

介質(zhì)裝填過緊

重新裝柱

色譜峰上升過緩或拖尾

介質(zhì)裝填太松

重新裝柱

柱床有裂縫或干涸

出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入

檢查管路是否有泄露或氣泡,重新裝柱

液流較慢

1.蛋白或脂類聚集

及時(shí)清洗介質(zhì)或?yàn)V膜

2.分離柱中微生物生長

所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣;

樣品上柱前必須離心或過濾

 

 

7.訂購信息

表4:訂購信息表

產(chǎn)品

規(guī)格

貨號(hào)

arProtein A Focurose HR

25ml

HQ320827025M

arProtein A Focurose HR

100ml

HQ320827100M

arProtein A Focurose HR

500ml

HQ320827500M

arProtein A Focurose HR

1L

HQ320827001L

arProtein A Focurose HR

5L

HQ320827005L

arProtein A Focurose HR

20L

HQ320827020L

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arProtein A Focurose HR

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