為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作,使用前請仔細閱讀本手冊,有任何疑問請咨詢本公司售后技術支持或當?shù)氐匿N售人員(聯(lián)系方式見附錄)。
1.產(chǎn)品介紹
PS Focurose HPL是一種特定的親和填料,適用于部分病毒、病毒樣顆粒以及某些特定的抗原和蛋白(見表2)的分離純化。
特點:
a.快速、簡單(一步純化)。
b.載量高。
c.易于放大。
表1:性能參數(shù)
介質(zhì) | PS Focurose HPL |
基質(zhì) | 高剛性瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
溶菌酶載量 | ≥3mg/ml介質(zhì) |
pH穩(wěn)定性 | 5-12(長期) 5-12(短期) |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
流速 | ≧300cm/h |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
表2:PS Focurose HPL適用性
Viruses | Viral/Microbial Agents |
Rabies Influenza Japanese Enchephalitis Feline Leukemia Feline Herpes Feline Calicivirus Respiratory Syncytial Virus Human Herpes Simplex Human Measles Human Parainfluenza | Herpes Simplex gA and gB Glycoprotein Subunits Hepatitis B Surface Antigen Filamentous Hemagglutinin from B. pertussis Leucocytosis Promoting Factor Hemagglutinin |
2.溶液配制
平衡液:0.01M PB,調(diào)節(jié)pH 7.2,4-8℃保存。
洗脫液:0.01M PB、1.0M NaCl,調(diào)節(jié)pH 7.2,室溫保存。
備注:平衡液pH為7.2±0.2,在平衡液中可經(jīng)添加0.1M NaCl抑制少量雜質(zhì)的吸附,取決樣品特性;洗脫時可以把NaCl可增加到2M來提高洗脫能力。
3.樣品的制備
a.樣品所在溶液鹽的組分及pH必須和平衡液保持一致,可以通過用平衡液稀釋或透析、超濾、G25進行緩沖液置換處理。
b.樣品過濾(粒徑≤45μm用0.22μm過濾、粒徑≤165μm用0.45μm過濾、粒徑≤300μm用0.8μm過濾,避免堵塞離子交換介質(zhì))。
備注:不建議直接用強酸或強堿調(diào)整樣品溶液的pH,可能會出現(xiàn)目標物的降解和失活。
4.純化流程(以XK16/10為例)
4.1用純化水以5ml/min沖洗5CV。
4.2用平衡液以5ml/min沖洗10CV。
4.3將樣品以2.5ml/min上樣,上樣完成后用平衡液進行清洗直至基線平穩(wěn)。
4.4用洗脫液以5ml/min洗脫10CV,并收集洗脫液。
4.5用純化水以5ml/min沖洗5CV。
4.6用保存液以5ml/min沖洗后保存。
5.清洗(以XK16/10為例)
清洗后可以去除一些強結合性物質(zhì)(例如一些強結合的蛋白、變性蛋白、脂類等),從而達到恢復介質(zhì)的優(yōu)良性能(例如載量、流動性、柱效等)。
建議每使用5-10次后進行一次清洗,具體清洗頻率需根據(jù)純化的初始樣品的潔凈度進行調(diào)整。
5.1用3M NaCl以1ml/min的流速沖洗10CV。
5.2用0.1M NaOH以1ml/min的流速沖洗20CV。
5.3用3M NaCl以1ml/min的流速沖洗10CV。
5.4用純化水以5ml/min的流速沖洗10CV。
5.5用保存液以5ml/min的流速沖洗5CV。
6.常見問題
表3:常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時目標物不與介質(zhì)結合 或結合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集 | 及時有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì) | |
4.目標物不帶電或與介質(zhì)帶同樣的電荷 | 篩選合適的結合緩沖液 | |
5.樣本或平衡液中鹽濃度和pH不正確 | 檢查樣品和平衡液中的電導和pH | |
6.選用了錯誤的緩沖液 | 參考緩沖液選擇表 | |
7.樣品中加入了不合適的去污劑 | 檢查樣品中是否有不合適的去污劑 | |
洗脫時沒有收集到目標物 或只收集到少量目標物 | 1.目標物沒有與介質(zhì)結合或結合量較少 | 先確認目標物是否與介質(zhì)結合 |
2.洗脫條件不合適 | 洗脫液洗脫能力不夠,加大鹽濃度和調(diào)整洗脫液pH | |
3.洗脫時間不夠 | 降低流速,延長洗脫液的保留時間 | |
4.洗脫體積過小 | 加大洗脫體積 | |
5.目標物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀 | 檢測目標物在洗脫液條件(鹽濃度和pH)下的溶解度和穩(wěn)定性。 | |
目標物純度較低
| 1.樣品沒有經(jīng)過前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當?shù)南♂寴悠?,降低粘度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時有效地清洗介質(zhì) | |
5.洗脫條件不佳 | 優(yōu)化洗脫條件 | |
6.目標物出現(xiàn)降解 | 檢測目標物的穩(wěn)定性 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
8.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
9.介質(zhì)中有微生物生長 | 介質(zhì)使用完后,請及時正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集,導致載量下降。 | 及時清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過多,配基被氧化或脫落 | 及時清洗介質(zhì)或更換新介質(zhì) | |
色譜峰上升過陡 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡,重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質(zhì)或濾膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分,以維持目標物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結合效率 | |
3.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣; 樣品上柱前必須離心或過濾 |
7.訂購信息
表4:訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
PS Focurose HPL | 25ml | HQ220325025M |
PS Focurose HPL | 100ml | HQ220325100M |
PS Focurose HPL | 500ml | HQ220325500M |
PS Focurose HPL | 1L | HQ220325001L |
PS Focurose HPL | 5L | HQ220325005L |
PS Focurose HPL | 20L | HQ220325020L |
備注:大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買,請咨詢本公司當?shù)劁N售或售前技術支持。
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