為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
IgY Focurose 6HP純化原理是利用電子供體和電子受體之間的相互作用（高鹽加強(qiáng)、低鹽減弱）來分離純化生物分子，可以快速、簡單從蛋黃中純化IgY。
特點：
a.快速、簡單（一步純化）。
b.載量高、流速快、易于放大。
表1：介質(zhì)性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)6%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 25-45um |
平均粒徑 | 35±5um |
結(jié)合載量 | 20mg(IgG)/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性 | 3-11(長期) 2-13(短期) |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖溶液中穩(wěn)定 30%異丙醇、70%乙醇、1M醋酸、0.5M NaOH |
流速 | ≥150cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-8℃ |
備注：每個雞蛋中約400mg IgY。
2.溶液制備
平衡液：0.02M PB、0.5M K2SO4，pH 7.5。
洗脫液：0.02M PB，pH 7.5。
再生液：0.02M PB、30%異丙醇，pH 7.5。
備注：當(dāng)結(jié)合效果不佳時，可以將平衡液中K2SO4更換為0.6-0.8M Na2SO4。
3.樣品制備
3.1將蛋黃從蛋清中充分的分離出來，加入九倍體積的純化水，在4℃溫和的攪拌6小時。
3.2高速離心(4℃,11500rpm)30min，取上清后按量加入K2SO4至濃度為0.5M，調(diào)節(jié)pH至7.5。
3.3樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
4.1采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
4.3用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。
4.4用平衡液以5ml/min的流速沖洗5個CV。
4.5用再生液以5ml/min的流速沖洗5個CV。
4.6用平衡液以5ml/min的流速沖洗5個CV。
4.6將樣品以5ml/min的流速上樣。
4.7用平衡液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（15個CV）。
4.8用洗脫液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（15個CV）。
4.9用再生液以5ml/min的流速沖洗10個CV。
4.10用純化水以5ml/min的流速沖洗10個CV。
4.11用保存液以5ml/min的流速沖洗5個CV。
5.常見問題
表2：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.目標(biāo)物和介質(zhì)結(jié)合力弱 | 增加平衡液中(NH4)2SO4濃度 | |
洗脫時沒有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合 |
2.洗脫時間不夠 | 降低流速，延長洗脫液的保留時間 | |
3.洗脫體積過小 | 加大洗脫體積 | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒有經(jīng)過前處理 | 上柱前必須要經(jīng)過過濾 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?，降低樣品粘度和濃度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時有效地清洗介質(zhì) | |
5.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
6.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
7.介質(zhì)中有微生物生長 | 介質(zhì)使用完后，請及時正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降 | 及時清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過多，配基逐漸脫落 | 更換新介質(zhì) | |
色譜峰上升過陡 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質(zhì)或濾膜 |
2.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過濾 |
6.訂購信息
表3：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
IgY Focurose HP | 25ml | HQ060219025M |
IgY Focurose HP | 100ml | HQ060219100M |
IgY Focurose HP | 500ml | HQ060219500M |
IgY Focurose HP | 1L | HQ060219001L |
IgY Focurose HP | 5L | HQ060219005L |
IgY Focurose HP | 20L | HQ060219020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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