價 格：詢價
規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L
產(chǎn) 地：中國
貨 號：HQ030316001L
品 牌：匯研生物
為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
Protein G Focurose 4FF適用于分離純化腹水、細胞培養(yǎng)上清、血清來源的單抗、多抗及Fc標簽蛋白等。
特點：
a.快速、簡單（一步純化）。
b.載量高、流速快、易于放大。
c.與Protein A Focurose 4FF相比，IgG結(jié)合面（更多的物種來源）更廣，結(jié)合能力更強（見表2）
表1：介質(zhì)性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)4%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
結(jié)合載量 | 20-30mg(人IgG)/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性 | 3-9(長期) 2-10(短期) |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖溶液中穩(wěn)定 70%乙醇、6M鹽酸胍（8天） |
流速 | ≧250cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-8℃ |
備注：
1.介質(zhì)的結(jié)合載量會因樣本的來源和亞型的變化而變化。
2.介質(zhì)如果長時間浸泡在洗脫液中，會導(dǎo)致配基水解，最終影響介質(zhì)載量。
表2：Protein A和 Protein G與不同種屬IgG的結(jié)合強度
種類 | 亞類 | Protein A | Protein G |
人 | IgA | 可變 | - |
IgD | - | - | |
IgE | - | - | |
IgG1 | ++++ | ++++ | |
IgG2 | ++++ | ++++ | |
IgG3 | - | ++++ | |
IgG4 | ++++ | ++++ | |
IgM | 可變 | - | |
豚鼠 | IgG1 | ++++ | ++ |
IgG2 | ++++ | ++ | |
倉鼠 | / | + | ++ |
小鼠 | IgG1 | + | ++++ |
IgG2a | ++++ | ++++ | |
IgG2b | +++ | +++ | |
IgG3 | ++ | +++ | |
IgM | 可變 | - | |
大鼠 | IgG1 | - | + |
IgG2a | - | ++++ | |
IgG2b | - | ++ | |
IgG3 | + | ++ | |
兔 | / | ++++ | +++ |
禽蛋黃 | IgY | - | - |
狗 | / | ++ | + |
豬 | / | +++ | +++ |
馬 | / | ++ | ++++ |
牛 | / | ++ | ++++ |
綿羊 | / | -/+ | ++ |
山羊 | / | - | ++ |
猴子 | / | ++++ | ++++ |
駱駝 | / | - | + |
熊 | / | - | + |
“-”：不結(jié)合 “+”：弱結(jié)合 “++”：結(jié)合 “+++”：中等結(jié)合 “++++”：強結(jié)合 | |||
2.溶液制備
平衡液：0.02M PB、0.15M NaCl， pH 7.0-7.4。
洗脫液：0.1M Glycine-HCl，pH 2.7。
中和液：1.0M Tris-HCl，pH 9.0。
3.樣品制備
3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進行裂解、透析/超濾/G25進行緩沖液置換。
3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
4.1采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
4.2用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。
4.3用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個CV。
4.4將樣品以1ml/min的流速上樣。
4.5用平衡液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個CV）。
4.6用洗脫液以5ml/min的流速洗脫10CV。
4.7用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。
4.8用20%乙醇以5ml/min的流速沖洗5個CV。
5.清洗
5.1用O.05M 甘氨酸、0.5M NaCl，pH 2.5沖洗20CV，立即用純化水沖洗10CV。
5.2用0.1M Tris-HCl、0.5M NaCl，pH 9.0沖洗20CV，立即用純化水沖洗10CV。
5.3用6M鹽酸胍沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。
5.4用70%乙醇沖洗10CV，立即用純化水沖洗10CV。
5.5用20%乙醇沖洗10CV。
6.常見問題
表3：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時目標物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集 | 及時有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì) | |
4.目標物和介質(zhì)結(jié)合力弱 | 確認IgG來源及亞型，選擇正確的介質(zhì) | |
5.純化時選擇的緩沖液不合適 | 確認樣本中的pH，結(jié)合力弱的目標物可以通過調(diào)高pH（8-9）和增加鹽濃度（1-3M NaCl）來提高樣本和介質(zhì)的結(jié)合力 | |
洗脫時沒有收集到目標物 或只收集到少量目標物 | 1.目標物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 先確認目標物是否與介質(zhì)結(jié)合 |
2.洗脫條件不合適 | 降低洗脫液pH至2.5-3.0 | |
3.洗脫時間不夠 | 降低流速，延長洗脫液的保留時間 | |
4.洗脫體積過小 | 加大洗脫體積 | |
目標物純度較低
| 1.樣品沒有經(jīng)過前處理 | 根據(jù)樣品的來源，上柱前必須要經(jīng)過離心、過濾或稀釋 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當?shù)南♂寴悠?，降低樣品粘度和濃度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時有效地清洗介質(zhì) | |
5.目標物出現(xiàn)降解 | 注意樣本純化前后的保存條件，不得在高溫、過酸、過堿條件長時間放置 | |
6.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
7.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
8.介質(zhì)中有微生物生長 | 介質(zhì)使用完后，請及時正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降 | 及時清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過多，配基逐漸脫落 | 更換新介質(zhì) | |
色譜峰上升過陡 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質(zhì)或濾膜 |
2.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過濾 |
7.訂購信息
表4：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
Protein G Focurose 4FF | 25ml | HQ030316025M |
Protein G Focurose 4FF | 100ml | HQ030316100M |
Protein G Focurose 4FF | 500ml | HQ030316500M |
Protein G Focurose 4FF | 1L | HQ030316001L |
Protein G Focurose 4FF | 5L | HQ030316005L |
Protein G Focurose 4FF | 20L | HQ030316020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
地址：武漢市東湖開發(fā)區(qū)高新二路388號光谷國際生物醫(yī)藥企業(yè)加速器C11棟20層
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