為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
GST Focurose 4FF適用于分離純化GST標(biāo)簽蛋白、谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶或谷胱甘肽依賴性蛋白。
特點：
a.快速、簡單（一步純化）。
b.載量高、流速快、易于放大。
c.溫和的洗脫條件可以完整的保留蛋白的生物學(xué)活性。
表1：介質(zhì)性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)4%的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 45-165μm |
平均粒徑 | 90±5μm |
結(jié)合載量 | >10mg(GST標(biāo)簽蛋白)/ml(介質(zhì)) |
pH穩(wěn)定性 | 3-12 |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用水溶液，如：1M醋酸鹽，pH 4.0、0.1M NaOH、70%乙醇、8M尿素、6M 鹽酸胍。 |
流速 | ≧250cm/h |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
2.溶液制備
平衡液：0.14M NaCl、0.0027M KCl、0.01M Na2HPO4、0.0018M KH2PO4，pH 7.3。
洗脫液：0.05M Tris-HCl、0.01M GSH，pH 8.0
3.樣品制備
3.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進行裂解、透析/超濾/G25進行緩沖液置換。
3.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以XK16/10為例）
4.1采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
4.2用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。
4.3用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個CV。
4.4將樣品以1ml/min的流速上樣。
4.5用平衡液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個CV）。
4.6用洗脫液以5ml/min的流速洗脫10CV。
5.放大
保持柱床高度不變
5.2 保持線性流速不變
備注：若實際情況和實驗室數(shù)據(jù)有偏差，可以維持停留時間不變。
6.清洗
清洗后可以去除一些強結(jié)合性物質(zhì)（例如一些強結(jié)合的蛋白、變性蛋白、脂類等），從而達到恢復(fù)介質(zhì)的優(yōu)良性能（例如載量、流動性、柱效等）。
建議每使用5次后進行一次清洗，具體清洗頻率需根據(jù)純化的初始樣品的潔凈度進行調(diào)整。
6.1 用5CV 1.0%Triton X-100或70%乙醇沖洗后，立即用10CV純化水沖洗。
備注：用于去除疏水結(jié)合物質(zhì)。
6.2 用5CV 8M尿素或6M鹽酸胍沖洗后，立即用10CV純化水沖洗。
備注：用于去除聚集在介質(zhì)中的沉淀或變性物質(zhì)。
6.3 用10CV的20%乙醇沖洗后保存。
備注：20%乙醇可以防止微生物的生長，20%乙醇保存的介質(zhì)可以在4-30℃（4-8℃更佳）保存。
7.常見問題
表2：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
純化時目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合 或結(jié)合量較低 | 1.上樣量過載 | 降低上樣量 |
2.上樣流速過快 | 降低上樣流速 | |
3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集 | 及時有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì) | |
4.樣品在超聲裂解過程中失活 | 采用較為溫和的條件進行超聲裂解 | |
5.樣本或平衡液中pH不在正確的范圍 | 保證樣本和平衡液pH在6.5-8.0以內(nèi) | |
6.表達條件過于劇烈,目標(biāo)物構(gòu)象發(fā)生改變，不能與介質(zhì)結(jié)合 | 建議做一個空載體作為表達和純化的對照 | |
7.目標(biāo)物質(zhì)發(fā)生聚集 | 在裂解前加入1-10mM DTT | |
洗脫時沒有收集到目標(biāo)物 或只收集到少量目標(biāo)物 | 1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少 | 先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合 |
2.洗脫條件不合適 | 加大GSH濃度到20-40mM，并保證洗脫液pH在8.0-9.0以內(nèi) | |
3.洗脫時間不夠 | 降低流速，延長洗脫液的保留時間 | |
4.洗脫體積過小 | 加大洗脫體積 | |
5.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀 | 檢測目標(biāo)物在洗脫液條件（pH）下的溶解度和穩(wěn)定性?？梢試L試在洗脫液中加入一些添加劑：如0.1%Triton X-100或2%N-octyl glucoside | |
目標(biāo)物純度較低
| 1.樣品沒有經(jīng)過前處理 | 樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾 |
2.樣品粘度過高 | 用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠?，降低粘度?/span> | |
3.洗雜不徹底 | 加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致 | |
4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀 | 及時有效地清洗介質(zhì) | |
5.洗脫條件不佳，洗脫流速太快、梯度太陡。 | 優(yōu)化洗脫條件 | |
6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解 | 檢測目標(biāo)物的穩(wěn)定性 | |
7.柱料裝填效果不佳 | 重新裝填或購買 | |
8.雜質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附 | 適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附 | |
9.分離柱頂部有較大儲樣體積 | 重新裝柱或降低儲樣體積 | |
10.介質(zhì)中有微生物生長 | 介質(zhì)使用完后，請及時正確保存介質(zhì) | |
介質(zhì)載量下降 | 1.上樣流速過快 | 降低上樣流速 |
2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。 | 及時清洗介質(zhì) | |
3.使用次數(shù)過多，配基被氧化或脫落 | 及時清洗介質(zhì)或更換新介質(zhì) | |
4.樣品在超聲裂解或表達時構(gòu)象改變，不能較好的與配基結(jié)合 | 采用溫和的裂解方式或表達條件 | |
色譜峰上升過陡 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰上升過緩或拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質(zhì)或濾膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率 | |
3.分離柱中微生物生長 | 所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣； 樣品上柱前必須離心或過濾 |
8.訂購信息
表3：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
GST Focurose 4FF | 25ml | HQ030307025M |
GST Focurose 4FF | 100ml | HQ030307100M |
GST Focurose 4FF | 500ml | HQ030307500M |
GST Focurose 4FF | 1L | HQ030307001L |
GST Focurose 4FF | 5L | HQ030307005L |
GST Focurose 4FF | 20L | HQ030307020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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