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TED Focurose FF

價格：詢價

規(guī) 格：25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

產(chǎn) 地：中國

貨號：HQ060310001L

品牌：匯研生物

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產(chǎn)品概述

為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細(xì)閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。

1.產(chǎn)品介紹

TED Focurose FF是利用其螯合的金屬離子與蛋白質(zhì)側(cè)鏈上的某些氨基酸(主要為組氨酸、半胱氨酸、色氨酸)相互作用而進行分離純化，適用于His標(biāo)簽蛋白及與金屬離子具有相互作用的生物分子的分離純化。強結(jié)合的金屬離子可以直接用于真核表達系統(tǒng)分泌表達的His標(biāo)簽蛋白且耐受更高的還原劑、螯合劑，無需進行樣品前處理；介質(zhì)的清洗再生工作簡單，無需脫鎳直接進行NaOH清洗。

特點：

a.快速、簡單（一步純化）。

b.耐受更高的還原劑、螯合劑，真核分泌表達的His標(biāo)簽蛋白無需前處理即可上樣，最大限度的保護蛋白活性。

c.無需脫鎳直接進行NaOH清洗，大大縮短了清洗周期。

d.多重選擇，可以螯合各種金屬離子進行使用（例如Ni2+、Cu2+、Zn2+、Fe2+、Co2+、Ca2+等）。

備注：當(dāng)螯合Ca2+時，避免使用磷酸鹽緩沖液（會形成沉淀）。

表1：TED Focurose FF性能參數(shù)

基質(zhì)	高度交聯(lián)6%的瓊脂糖
粒徑范圍	45-165μm
平均粒徑	90±5μm
結(jié)合載量	≥10mg(His標(biāo)簽蛋白)/ml(介質(zhì))
pH穩(wěn)定性	3-12（工作）2-14（清洗）
化學(xué)穩(wěn)定性	0.01M鹽酸、0.01M氫氧化鈉（一周） 20mM EDTA、10mM DTT、1M氫氧化鈉、8M尿素、6M鹽酸胍(24小時) 100mM EDTA、0.5M 咪唑（2小時） 30% 異丙醇（20分鐘）
兼容性	所有在Ni-6FF（IMAC）中正常使用的溶液
流速	≧300cm/h
操作壓力	≤0.3MPa
貯存溶液	20%乙醇
貯存溫度	4-30℃

2.螯合（以XK16/10為例）

2.1采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。

2.2用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

2.3用0.1M 金屬離子溶液以5ml/min的流速沖洗5個CV。

2.4用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

2.5用20%乙醇以5ml/min的流速沖洗5個CV。

3.溶液制備

平衡液：0.02M PB、0.5M NaCl、0.005-0.01M Imidazole，pH 7.4。

洗脫液：0.02M PB、0.5M NaCl、0.5M Imidazole，pH 7.4。

備注：當(dāng)純化包涵體時，溶液中要添加8M Urea或6M Gua-HCl；包涵體變性后純化會出現(xiàn)結(jié)合力降低，從而導(dǎo)致不結(jié)合。

4.樣品制備

4.1樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液進行裂解、透析/超濾/G25進行緩沖液置換。

4.2樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。

5.純化流程（以XK16/10為例）

5.1采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)或蠕動泵或注射器上。

5.2用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

5.3用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5個CV。

5.4用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

5.5將樣品以5ml/min的流速上樣。

5.6用平衡液以5ml/min的流速沖洗至紫外吸收值平穩(wěn)（10-15個CV）。

5.7用洗脫液以5ml/min的流速洗脫5CV或20CV(階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。

6.清洗（以XK16/10為例）

6.1 用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

6.2 用1.5M NaCl以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.3 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.4 用1.0M NaOH以2.5ml/min的流速沖洗30個CV。

6.5 用平衡液以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.6 用純化水以5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.7 用30%異丙醇以2.5ml/min的流速沖洗10個CV。

6.8 用純化水以5ml/min的流速沖洗5個CV。

6.9 用20%乙醇以5ml/min的流速沖洗5個CV。

7.常見問題

表2：常見問題及解決方案

問題	可能原因	解決方案
純化時目標(biāo)物不與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較低	1.上樣量過載	降低上樣量
	2.上樣流速過快	降低上樣流速
	3.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集影響結(jié)合	及時有效地清洗介質(zhì)或更換新的介質(zhì)
	4.表達條件過于劇烈,His標(biāo)簽被包裹，不能與介質(zhì)結(jié)合	建議做一個空載體作為表達和純化的對照，確定表達條件是否合適
	5.初始樣品中沒有組氨酸標(biāo)簽蛋白	通過基因序列或His標(biāo)簽抗體核實
	6.目標(biāo)蛋白出現(xiàn)在流穿中	目標(biāo)蛋白沒有成功表達或樣品與平衡液中pH及組分不正確
洗脫時沒有收集到目標(biāo)物或只收集到少量目標(biāo)物	1.目標(biāo)物沒有與介質(zhì)結(jié)合或結(jié)合量較少	先確認(rèn)目標(biāo)物是否與介質(zhì)結(jié)合
	2.洗脫條件不合適	加大洗脫液中咪唑濃度
	3.洗脫時間不夠	降低流速，延長洗脫液的保留時間
	4.洗脫體積過小	加大洗脫體積
	5.洗雜時，目的蛋白被洗下來	降低洗雜液中的咪唑濃度
	6.目標(biāo)物在洗脫液條件下出現(xiàn)聚集沉淀	檢測目標(biāo)物在洗脫液條件（pH和鹽濃度）下的溶解度和穩(wěn)定性。可以嘗試在洗脫液中加入一些添加劑：如0.2% Triton X-100或0.5% Tween 20
目標(biāo)物純度較低	1.樣品沒有經(jīng)過前處理	樣品上柱前必須要經(jīng)過離心或過濾
	2.樣品粘度過高	用平衡液適當(dāng)?shù)南♂寴悠罚档驼扯取?/span>
	3.洗雜不徹底	加大洗雜體積直至基線平穩(wěn)并與平衡液一致
	4.雜質(zhì)蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集沉淀	及時有效地清洗介質(zhì)
	5.雜質(zhì)與Ni2+具有較高的親和力。	用其它類型介質(zhì)進行純化（如離子或分子篩）
	6.目標(biāo)物出現(xiàn)降解	檢測目標(biāo)物的穩(wěn)定性并加入蛋白酶抑制劑
	7.柱料裝填效果不佳	重新裝填或購買
	8.雜質(zhì)與介質(zhì)出現(xiàn)非特異性吸附	適當(dāng)選擇添加劑降低非特異性吸附,可以嘗試在樣品中加入一些添加劑：如0.5%Triton X-100、1.0% Tween 20或50%甘油
	9.分離柱頂部有較大儲樣體積	重新裝柱或降低儲樣體積
	10.介質(zhì)中有微生物生長	介質(zhì)使用完后，請及時正確保存介質(zhì)
介質(zhì)載量下降	1.上樣流速過快	降低上樣流速
	2.蛋白或脂類在介質(zhì)中聚集，導(dǎo)致載量下降。	及時清洗介質(zhì)
	3.使用次數(shù)過多	更換新介質(zhì)
	4.表達條件過于劇烈,His標(biāo)簽被包裹，不能較好與介質(zhì)結(jié)合	建議做一個空載體作為表達和純化的對照，確定表達條件是否合適
色譜峰上升過陡	介質(zhì)裝填過緊	重新裝柱
色譜峰上升過緩或拖尾	介質(zhì)裝填太松	重新裝柱
柱床有裂縫或干涸	出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入	檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱
液流較慢	1.蛋白或脂類聚集	及時清洗介質(zhì)或濾膜
	2.蛋白沉淀在介質(zhì)中	調(diào)整平衡液和洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性和介質(zhì)的結(jié)合效率
	3.分離柱中微生物生長	所用試劑必須經(jīng)過過濾和脫氣；樣品上柱前必須離心或過濾

8.訂購信息

表3：訂購信息表

產(chǎn)品	規(guī)格	貨號
TED Focurose FF	25ml	HQ060310025M
TED Focurose FF	100ml	HQ060310100M
TED Focurose FF	500ml	HQ060310500M
TED Focurose FF	1L	HQ060310001L
TED Focurose FF	5L	HQ060310005L
TED Focurose FF	20L	HQ060310020L