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MMC Focurose BB是一種多模式耐鹽生物分離介質(zhì),適用于蛋白、多肽、核酸等所有帶電的生物分子的組群分離、中度純化。
1 產(chǎn)品介紹
圖1:MMC Focurose BB的配基是一種多模式配基,它與目標(biāo)分子存在許多類型的相互作用,主要是離子作用,其次是氫鍵作用和疏水作用等。
特點:
a.在高電導(dǎo)條件下結(jié)合帶電分子,樣本不再受電導(dǎo)的限制,樣本不需要前處理就可進(jìn)行離子交換。
b.處理樣本體積大。
c.和傳統(tǒng)離子交換介質(zhì)相比,具有新的選擇性。
d.大顆粒,快流速。
表1:MMC Focurose BB 性能參數(shù)
名稱 | MMC Focurose BB |
基質(zhì) | 高度交聯(lián)6%瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 100-300μm |
平均粒徑 | ≈200μm |
介質(zhì)類型 | 復(fù)合模式 |
離子載量 | 120-150umol H+/ml 介質(zhì) |
pH穩(wěn)定性 | 2-14(短期)3-12(長期) |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
最大流速 | 1800cm/h |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖液、1.0M氫氧化鈉、8M尿素、6M鹽酸胍、70%乙醇 避免使用氧化劑、陽離子去污劑、陽離子緩沖液 |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
2 選擇指導(dǎo)
2.1 離子交換介質(zhì)的選擇
圖2:離子交換介質(zhì)的選擇
說明:
a.當(dāng)目標(biāo)物所在溶液的pH?目標(biāo)物的等電點時,選擇陽離子交換介質(zhì)。
b.當(dāng)目標(biāo)物所在溶液的pH?目標(biāo)物的等電點時,選擇陰離子交換介質(zhì)。
c.所使用溶液的pH應(yīng)該在離子交換介質(zhì)的使用pH范圍以內(nèi)。
2.2 緩沖溶液的選擇
表2:推薦緩沖液
pH范圍 | 緩沖鹽1 | 濃度2(mM) |
4.0-5.5 | Acetate | 20-100 |
3.0-6.5 | Citrate | 20-200 |
5.5-6.5 | Bis-Tris | 20-50 |
6.0-7.5 | Phosphate | 20-200 |
7.5-9.0 | Tris | 20-50 |
8.8-10.6 | Glycin-NaOH | 20-100 |
說明:
a.選擇的緩沖液和鹽可能會干擾性能。
b.電導(dǎo)調(diào)節(jié)可以通過添加鹽或改變緩沖液的濃度。
c.在溶液配制后,須經(jīng)過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用0.8μm過濾)和脫氣處理(超聲或負(fù)壓)。
3 樣品的制備
樣品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液稀釋或透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。
樣品過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用 0.8μm過濾)。
4 純化流程(以XK16/10為例)
采用液滴對液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗5CV(CV指柱床體積,下同)。
用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5CV。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
將樣品以5ml/min的流速上樣。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
用洗脫液以5ml/min洗脫5CV或20CV(根據(jù)前期篩選實驗數(shù)據(jù),采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。
用再生液以5ml/min的流速沖洗5CV。
備注:再生液=平衡液+1M NaCl,其它組分不變。
5 放大
保持柱床高度不變
5.2 保持線性流速不變
備注:若實際情況和實驗室數(shù)據(jù)有偏差,可以維持停留時間不變。
6 維護(hù)
6.1平衡
柱子裝填完成后,用平衡液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。
6.2再生
每次分離純化后,用再生液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。
6.3在位清洗
在位清洗用于清洗再生沒有清洗干凈的物質(zhì),例如脂類、沉淀物、變性蛋白。
a.強離子結(jié)合蛋白
用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向沖洗5CV。
b.沉淀物、疏水結(jié)合蛋白、脂蛋白
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
c.脂類、強疏水蛋白。
用1.0M NaOH,30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV
6.4消毒
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
6.5滅菌
將介質(zhì)置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進(jìn)行高壓滅菌。
6.6保存
介質(zhì)在20%乙醇中4-30℃保存。
7 訂購信息
表4:訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
MMC Focurose BB | 25ml | HF060505025M |
MMC Focurose BB | 100ml | HF060505100M |
MMC Focurose BB | 500ml | HF060505500M |
MMC Focurose BB | 1L | HF060505001L |
MMC Focurose BB | 5L | HF060505005L |
MMC Focurose BB | 20L | HF060505020L |
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