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MMA Focurose HP是一種多模式生物分離介質(zhì),主要應(yīng)用于單抗的中度純化和精細純化(用于去除Protein A純化后樣品中的Protein A*、二聚體、多聚物、宿主細胞蛋白、核酸),也可以應(yīng)用于其它生物分子的精細純化(去除二聚體、多聚物、宿主細胞蛋白、核酸等)。
*:在Protein A-4HF使用過程中可能脫落的極微量Protein A。
1 產(chǎn)品介紹
圖1:MMA Focurose HP的配基是一種多模式配基,它與目標分子存在許多類型的相互作用,主要是離子作用(強陰離子作用),其次是氫鍵作用和疏水作用等。
特點:
a.在高電導(dǎo)條件下結(jié)合帶電分子,樣本不再受電導(dǎo)的限制,樣本不需要前處理就可進行離子交換。
b.載量高,采用流穿模式時具有更高處理量。
c.和傳統(tǒng)離子交換介質(zhì)相比,具有新的選擇性。
d.小顆粒,高分辨率。
表1:MMA Focurose HP 性能參數(shù)
名稱 | MMA Focurose HP |
基質(zhì) | 高度交聯(lián)6%瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 25-45μm |
平均粒徑 | ≈34μm |
介質(zhì)類型 | 復(fù)合模式 |
離子載量 | 80-110umol Cl-/ml 介質(zhì) |
pH穩(wěn)定性 | 2-14(短期)4-12(長期) |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
流速 | ≥150cm/h |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用緩沖液、1.0M氫氧化鈉、8M尿素、6M鹽酸胍、70%乙醇 避免使用氧化劑、陽離子去污劑、陽離子緩沖液 |
貯存溶液 | 20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
2 選擇指導(dǎo)
2.1 離子交換介質(zhì)的選擇
圖2:離子交換介質(zhì)的選擇
說明:
a.當目標物所在溶液的pH?目標物的等電點時,選擇陽離子交換介質(zhì)。
b.當目標物所在溶液的pH?目標物的等電點時,選擇陰離子交換介質(zhì)。
c.所使用溶液的pH應(yīng)該在離子交換介質(zhì)的使用pH范圍以內(nèi)。
2.2 緩沖溶液的選擇
表2:推薦緩沖液
pH范圍 | 緩沖鹽1 | 濃度2(mM) |
4.0-5.0 | Acetate | 20-100 |
4.0-6.0 | Citrate | 20-200 |
5.5-6.5 | Bis-Tris | 20-50 |
6.0-7.5 | Phosphate | 20-200 |
7.5-8.5 | Tris | 20-50 |
8.5-10.5 | Glycin-NaOH | 20-100 |
說明:
a.選擇的緩沖液和鹽可能會干擾性能。
b.電導(dǎo)調(diào)節(jié)可以通過添加鹽或改變緩沖液的濃度。
c.在溶液配制后,須經(jīng)過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用0.8μm過濾)和脫氣處理(超聲或負壓)。
3 樣品的制備
樣品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液稀釋或透析/超濾/G25進行緩沖液置換。
樣品過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用 0.8μm過濾)。
4 純化流程(以XK16/10為例)
采用液滴對液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
用平衡液以3ml/min的流速沖洗5CV(CV指柱床體積,下同)。
用洗脫液以3ml/min的流速沖洗5CV。
用平衡液以3ml/min的流速沖洗10CV。
將樣品以3ml/min的流速上樣。
用平衡液以3ml/min的流速沖洗10CV。
用洗脫液以3ml/min洗脫5CV或20CV(根據(jù)前期篩選實驗數(shù)據(jù),采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。
用再生液以3ml/min的流速沖洗5CV。
備注:再生液=平衡液+2M NaCl,其它組分不變。
5 放大
保持柱床高度不變
5.2 保持線性流速不變
備注:若實際情況和實驗室數(shù)據(jù)有偏差,可以維持停留時間不變。
6 維護
6.1平衡
柱子裝填完成后,用平衡液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。
6.2再生
每次分離純化后,用再生液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。
6.3在位清洗
在位清洗用于清洗再生沒有清洗干凈的物質(zhì),例如脂類、沉淀物、變性蛋白。
a.強離子結(jié)合蛋白
用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向沖洗5CV。
b.沉淀物、疏水結(jié)合蛋白、脂蛋白
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
c.脂類、強疏水蛋白。
用1.0M NaOH,30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV
6.4消毒
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
6.5滅菌
將介質(zhì)置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進行高壓滅菌。
6.6保存
介質(zhì)在20%乙醇中4-30℃保存。
7 訂購信息
表3:訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
MMA Focurose HP | 25ml | HF060209025M |
MMA Focurose HP | 100ml | HF060209100M |
MMA Focurose HP | 500ml | HF060209500M |
MMA Focurose HP | 1L | HF060209001L |
MMA Focurose HP | 5L | HF060209005L |
MMA Focurose HP | 20L | HF060209020L |
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