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DEAE Focurose BB

價 格:詢價

規(guī) 格:25ml/100ml/500ml/1L/5L/20L

產 地:中國

貨 號:HL060507001L

品 牌:匯研生物


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產品概述

    為確保產品的性能和無憂的操作,使用前請仔細閱讀本手冊,有任何疑問請咨詢本公司技術支持或當地的銷售人員。

DEAE Focurose BB是弱陰離子交換介質,適用于蛋白、多肽、核酸等所有帶電的生物分子的分離純化。大顆粒設計,多應用在高粘度樣品的初步捕獲。


1 產品介紹

特點:

a.容易放大。

b.高流速。

c.高化學耐受性。

d.便于維護。

 

表1:DEAE Focurose BB 性能參數

基質

6%高度交聯的瓊脂糖

粒徑范圍

100-300μm

平均粒徑

≈200μm

介質類型

弱陰離子交換

帶電基團

-N+(C2H5)2H

離子載量

0.10-0.15mmol Cl-/ml介質

操作壓力

≤0.3MPa

流速

1200-1800cm/h

pH穩(wěn)定性

2-9(工作)/2-12(長期)/ 2-14(短期)

化學穩(wěn)定性

常用緩沖液、1.0M氫氧化鈉、8M 尿素、6M 鹽酸胍、70%乙醇

避免使用

氧化劑、陰離子型去污劑、陰離子型緩沖液

貯存溶液

20%乙醇

貯存溫度

4-30℃

 

2 選擇指導

2.1 離子交換介質的選擇

圖1:離子交換介質的選擇

說明:

a.當目標物所在溶液的pH?目標物的等電點時,選擇陽離子交換介質。

b.當目標物所在溶液的pH?目標物的等電點時,選擇陰離子交換介質。

c.所使用溶液的pH應該在離子交換介質的使用pH范圍以內。

2.2 緩沖溶液的選擇

表2:陰離子交換緩沖液

pH范圍

緩沖鹽

濃度(mM)

平衡離子

pKa(25℃)

4.3-5.3

N-Methylpiperazine

20

Cl-

4.75

4.8-5.8

Piperazine

20

Cl-或HCOO-

5.33

5.5-6.5

L-Histidine

20

Cl-

6.04

6.0-7.0

bis-Tris

20

Cl-

6.48

6.2-7.2

bis-Tris propane

20

Cl-

6.65

7.3-8.3

Triethanolamine

20

Cl-或CH3COO-

7.76

7.6-8.6

Tris

20

Cl-

8.07

8.0-9.0

N-Methyl-diethanolamine

20

SO42-

8.52

8.0-9.0

N-Methyl-diethanolamine

50

Cl-或CH3COO-

8.52

8.4-9.4

Diethanolamine

50

Cl-

8.88

8.4-9.4

Propane 1,3-Diamino

20

Cl-

8.88

8.6-9.6

bis-Tris propane

20

Cl-

9.10

9.0-10.0

Ethanolamine

20

Cl-

9.50

9.2-10.2

Piperazine

20

Cl-

9.73

10.0-11.0

Propane 1,3-Diamino

20

Cl-

10.55

10.6-11.6

Piperidine

20

Cl-

11.12

 

表3:陽離子交換緩沖液

pH范圍

緩沖鹽

濃度(mM)

平衡離子

pKa(25℃)

1.4-2.4

Maleic acid

20

Na+

1.92

2.6-3.6

Methyl malonic acid

20

Na+或Li+

3.07

2.6-3.6

Citric acid

20

Na+

3.13

3.3-4.3

Lactic acid

50

Na+

3.86

3.3-4.3

Formic acid

50

Na+或Li+

3.75

3.7-4.7

Succinic acid

50

Na+

4.21

4.3-5.3

Acetic acid

50

Na+或Li+

4.75

5.1-6.1

Succinic acid

50

Na+

5.64

5.2-6.2

Methyl malonic acid

50

Na+或Li+

5.76

5.6-6.6

MES

50

Na+或Li+

6.27

6.7-7.7

Phosphate

50

Na+

7.20

7.0-8.0

HEPES

50

Na+或Li+

7.56

7.8-8.8

BICINE

50

Na+

8.33

 

說明:

a.按照表2和表3選擇緩沖溶液的種類和濃度。

b.錯誤的緩沖液(種類和濃度)會干擾分離效果(如分離度、載量、pH波動等)。

c.所使用緩沖液的pH應該在離子交換介質的使用pH范圍內。

d.使用分析純或者更高純度的緩沖液。

e.在溶液配制后,須經過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用0.8μm過濾)和脫氣處理(超聲或負壓)。

 

3 樣品的制備

樣品所在溶液要和平衡液保持一致,可以用平衡液稀釋或透析/超濾/G25進行緩沖液置換。

樣品過濾(平均粒徑<45μm,用0.22μm過濾;45μm<平均粒徑<165μm,用0.45μm過濾;平均粒徑>165μm,用   0.8μm過濾)。

 

4 純化流程(以XK16/10為例)

采用液滴對液滴(避免引入氣泡)的方式將柱子連接到層析系統上。

用平衡液以5ml/min的流速沖洗5CV(CV指柱床體積,下同)。

用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5CV。

用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。

將樣品以5ml/min的流速上樣。

用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。

用洗脫液以5ml/min洗脫5CV或20CV(根據前期篩選實驗數據,采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。

用再生液以5ml/min的流速沖洗5CV。

備注:再生液=平衡液+1M NaCl,其它組分不變。

 

5 放大

保持柱床高度不變

5.2 保持線性流速不變

備注:若實際情況和實驗室數據有偏差,可以維持停留時間不變。

 

6 維護

6.1平衡

柱子裝填完成后,用平衡液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導和pH值恒定。

6.2再生

每次分離純化后,用再生液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導和pH值恒定。

6.3在位清洗

在位清洗用于清洗再生沒有清洗干凈的物質,例如脂類、沉淀物、變性蛋白。

a.強離子結合蛋白

用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向沖洗5CV。

b.沉淀物、疏水結合蛋白、脂蛋白

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。

c.脂類、強疏水蛋白。

用1.0M NaOH,30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV

6.4消毒

用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。

6.5滅菌

將介質置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進行高壓滅菌。

6.6保存

介質在20%乙醇中4-30℃保存。

 

7 訂購信息

表4:訂購信息表

產品

規(guī)格

貨號

DEAE Focurose BB

25ml

HL060507025M

DEAE Focurose BB

100ml

HL060507100M

DEAE Focurose BB

500ml

HL060507500M

DEAE Focurose BB

1L

HL060507001L

DEAE Focurose BB

5L

HL060507005L

DEAE Focurose BB

20L

HL060507020L

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DEAE Focurose BB

DEAE Focurose BB

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