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SP Focurose BB是強(qiáng)陽離子交換介質(zhì)，適用于蛋白、多肽、核酸等所有帶電的生物分子的分離純化。大顆粒設(shè)計，多應(yīng)用在高粘度樣品的初步捕獲。
1 產(chǎn)品介紹
特點(diǎn)：
a.容易放大。
b.高流速。
c.高化學(xué)耐受性。
d.便于維護(hù)。
表1：SP Focurose BB 性能參數(shù)
基質(zhì) | 6%高度交聯(lián)的瓊脂糖 |
粒徑范圍 | 100-300μm |
平均粒徑 | 200±30μm |
介質(zhì)類型 | 強(qiáng)陽離子交換 |
帶電基團(tuán) | -SO3- |
離子載量 | 0.18-0.25mmol H+/ml介質(zhì) |
操作壓力 | ≤0.3MPa |
流速 | ≧1000cm/h |
pH穩(wěn)定性 | 4-12（工作）/4-13（長期）/ 3-14（短期） |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 常用緩沖液、1.0M氫氧化鈉、8M 尿素、6M 鹽酸胍、70%乙醇 |
避免使用 | 氧化劑、陽離子型去污劑、陽離子型緩沖液 |
貯存溶液 | 0.2M NaAc，20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
2 選擇指導(dǎo)
2.1 離子交換介質(zhì)的選擇
圖1：離子交換介質(zhì)的選擇
說明：
a.當(dāng)目標(biāo)物所在溶液的pH?目標(biāo)物的等電點(diǎn)時，選擇陽離子交換介質(zhì)。
b.當(dāng)目標(biāo)物所在溶液的pH?目標(biāo)物的等電點(diǎn)時，選擇陰離子交換介質(zhì)。
c.所使用溶液的pH應(yīng)該在離子交換介質(zhì)的使用pH范圍以內(nèi)。
2.2 緩沖溶液的選擇
表2：陰離子交換緩沖液
pH范圍 | 緩沖鹽 | 濃度（mM） | 平衡離子 | pKa(25℃) |
4.3-5.3 | N-Methylpiperazine | 20 | Cl- | 4.75 |
4.8-5.8 | Piperazine | 20 | Cl-或HCOO- | 5.33 |
5.5-6.5 | L-Histidine | 20 | Cl- | 6.04 |
6.0-7.0 | bis-Tris | 20 | Cl- | 6.48 |
6.2-7.2 | bis-Tris propane | 20 | Cl- | 6.65 |
7.3-8.3 | Triethanolamine | 20 | Cl-或CH3COO- | 7.76 |
7.6-8.6 | Tris | 20 | Cl- | 8.07 |
8.0-9.0 | N-Methyl-diethanolamine | 20 | SO42- | 8.52 |
8.0-9.0 | N-Methyl-diethanolamine | 50 | Cl-或CH3COO- | 8.52 |
8.4-9.4 | Diethanolamine | 50 | Cl- | 8.88 |
8.4-9.4 | Propane 1,3-Diamino | 20 | Cl- | 8.88 |
8.6-9.6 | bis-Tris propane | 20 | Cl- | 9.10 |
9.0-10.0 | Ethanolamine | 20 | Cl- | 9.50 |
9.2-10.2 | Piperazine | 20 | Cl- | 9.73 |
10.0-11.0 | Propane 1,3-Diamino | 20 | Cl- | 10.55 |
10.6-11.6 | Piperidine | 20 | Cl- | 11.12 |
表3：陽離子交換緩沖液
pH范圍 | 緩沖鹽 | 濃度（mM） | 平衡離子 | pKa(25℃) |
1.4-2.4 | Maleic acid | 20 | Na+ | 1.92 |
2.6-3.6 | Methyl malonic acid | 20 | Na+或Li+ | 3.07 |
2.6-3.6 | Citric acid | 20 | Na+ | 3.13 |
3.3-4.3 | Lactic acid | 50 | Na+ | 3.86 |
3.3-4.3 | Formic acid | 50 | Na+或Li+ | 3.75 |
3.7-4.7 | Succinic acid | 50 | Na+ | 4.21 |
4.3-5.3 | Acetic acid | 50 | Na+或Li+ | 4.75 |
5.1-6.1 | Succinic acid | 50 | Na+ | 5.64 |
5.2-6.2 | Methyl malonic acid | 50 | Na+或Li+ | 5.76 |
5.6-6.6 | MES | 50 | Na+或Li+ | 6.27 |
6.7-7.7 | Phosphate | 50 | Na+ | 7.20 |
7.0-8.0 | HEPES | 50 | Na+或Li+ | 7.56 |
7.8-8.8 | BICINE | 50 | Na+ | 8.33 |
說明：
a.按照表2和表3選擇緩沖溶液的種類和濃度。
b.錯誤的緩沖液（種類和濃度）會干擾分離效果(如分離度、載量、pH波動等)。
c.所使用緩沖液的pH應(yīng)該在離子交換介質(zhì)的使用pH范圍內(nèi)。
d.使用分析純或者更高純度的緩沖液。
e.在溶液配制后，須經(jīng)過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用0.8μm過濾）和脫氣處理（超聲或負(fù)壓）。
3 樣品的制備
樣品所在溶液要和平衡液保持一致，可以用平衡液稀釋或透析/超濾/G25進(jìn)行緩沖液置換。
樣品過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4 純化流程（以XK16/10為例）
采用液滴對液滴（避免引入氣泡）的方式將柱子連接到層析系統(tǒng)上。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗5CV（CV指柱床體積，下同）。
用洗脫液以5ml/min的流速沖洗5CV。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
將樣品以5ml/min的流速上樣。
用平衡液以5ml/min的流速沖洗10CV。
用洗脫液以5ml/min洗脫5CV或20CV(根據(jù)前期篩選實(shí)驗數(shù)據(jù)，采用階梯式洗脫5CV/線性梯度洗脫20CV)。
用再生液以5ml/min的流速沖洗5CV。
備注：再生液=平衡液+1M NaCl，其它組分不變。
5 放大
保持柱床高度不變
5.2 保持線性流速不變
備注：若實(shí)際情況和實(shí)驗室數(shù)據(jù)有偏差，可以維持停留時間不變。
6 維護(hù)
6.1平衡
柱子裝填完成后，用平衡液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。
6.2再生
每次分離純化后，用再生液以60cm/h的流速沖洗5CV或沖洗至電導(dǎo)和pH值恒定。
6.3在位清洗
在位清洗用于清洗再生沒有清洗干凈的物質(zhì)，例如脂類、沉淀物、變性蛋白。
a.強(qiáng)離子結(jié)合蛋白
用2.0M NaCl以60cm/h的流速反向沖洗5CV。
b.沉淀物、疏水結(jié)合蛋白、脂蛋白
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
c.脂類、強(qiáng)疏水蛋白。
用1.0M NaOH，30%異丙醇以30cm/h的流速反向沖洗5CV
6.4消毒
用1.0M NaOH以30cm/h的流速反向沖洗5CV。
6.5滅菌
將介質(zhì)置換到0.5M NaCl ,pH 7.0的溶液中進(jìn)行高壓滅菌。
6.6保存
介質(zhì)在0.2M NaAc 、20%乙醇中4-30℃保存。
7 訂購信息
表4：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
SP Focurose BB | 25ml | HL060501025M |
SP Focurose BB | 100ml | HL060501100M |
SP Focurose BB | 500ml | HL060501500M |
SP Focurose BB | 1L | HL060501001L |
SP Focurose BB | 5L | HL060501005L |
SP Focurose BB | 20L | HL060501020L |
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