為確保產(chǎn)品的性能和無憂的操作，使用前請仔細閱讀本手冊，有任何疑問請咨詢本公司售后技術(shù)支持或當(dāng)?shù)氐匿N售人員（聯(lián)系方式見附錄）。
1.產(chǎn)品介紹
Focurose 30 PG是一種凝膠過濾層析介質(zhì)（也叫體積排阻色譜），適用于實驗室和工業(yè)生產(chǎn)規(guī)模的生物分子精細純化和緩沖液置換。
特點：
a.高耐壓，流速快。
b.粒徑小，分辯率高。
c.兼容性好，能耐受更苛刻的清洗條件。
表1：性能參數(shù)
基質(zhì) | 高度交聯(lián)的瓊脂糖和葡聚糖 |
粒徑范圍 | 25-45μm |
平均粒徑 | 35±5μm |
分離范圍 | ≤10kDa（球蛋白） |
pH穩(wěn)定性 | 3-12（長期） 1-14（短期） |
耐壓 | 0.3MPa |
推薦流速 | 30-50cm/h |
最大使用流速 | 90cm/h |
化學(xué)穩(wěn)定性 | 所有常用溶液：8M尿素、6M鹽酸胍、70%乙醇、1M 氫氧化鈉 |
高壓滅菌 | 121℃×30min(0.5M 氯化鈉，pH 7.0) |
貯存條件 | 0.2M醋酸鈉，20%乙醇 |
貯存溫度 | 4-30℃ |
2.溶液制備
洗脫液：根據(jù)客戶需求進行配制。
備注：建議在目標(biāo)溶液中加入一定濃度的鹽（至少0.025 M）用來抑制樣本和介質(zhì)的離子作用。
3.樣品制備
3.1濃縮樣品上樣前過濾（平均粒徑<45μm，用0.22μm過濾；45μm<平均粒徑<165μm，用0.45μm過濾；平均粒徑>165μm，用 0.8μm過濾）。
4.純化流程（以裝填XK 16/70的柱子為例 ）
4.1清洗
取140g的沉降介質(zhì)，加入3倍體積的純化水重懸后用G3砂芯漏斗抽干，重復(fù)此步驟兩次。
4.2勻漿
將清洗完的抽干的介質(zhì)用相同體積(≈140ml)的純化水進行重懸，用玻璃棒緩慢攪拌均勻。
4.3準(zhǔn)備柱子
a.將柱管、下柱頭、適配器以及裝柱器用純化水沖洗干凈；
b.安裝下柱頭后擰緊密封圈；
c.注入3-5cm高的純化水；
d.擰下下堵頭，待排出所有氣泡后再擰上下堵頭；
e.安裝裝柱器，將層析柱垂直固定在層析系統(tǒng)附近。
4.4脫氣
將勻漿后的介質(zhì)用真空泵或超聲清洗裝置進行脫氣。
4.5裝柱
a. 將脫氣后的介質(zhì)用玻璃棒或其它攪拌裝置溫和攪拌均勻后，快速、連續(xù)加入（用玻璃棒引流，避免引入氣 泡）到層析柱中。
b. 快速用純化水將裝柱器上端填滿，并裝上裝柱器蓋。
c. 用管路連接層析系統(tǒng)和裝柱器后，擰下下堵頭，以3ml/min(90cm/h)的流速壓柱120min后暫停層析系統(tǒng)。
d. 擰上下堵頭，快速取下裝柱器，用純化水填滿柱管。
e. 將適配器連接層析系統(tǒng)，待管路中氣泡排盡后，將適配器稍微傾斜后插入柱管至介質(zhì)界面上端0.5-1cm，擰緊密封圈。
f. 擰下下堵頭，以7ml/min(210cm/h)的流速壓柱30min后停止層析系統(tǒng)。
g. 標(biāo)記介質(zhì)界面刻度，將適配器壓至介質(zhì)界面以下0.3cm。
4.6柱效檢測
a. 連接層析柱出口至層析系統(tǒng)，用純化水以1ml/min(30cm/h)的流速平衡2CV(柱體積)；
b. 用定量環(huán)或上樣泵注入1%CV的2%丙酮；
c. 以1ml/min(30cm/h)的流速運行1.5CV；
d. 計算HETP和As，HETP≤3h（h為平均粒徑）且0.7≤As≤1.3方為合格，否則重裝。
4.7使用
若柱效檢測合格可立即使用，以1ml/min(30cm/min)的流速用平衡液（平衡液中加入0.15M氯化鈉，抑制可能存在的非特異性吸附）平衡2CV后進行進樣（建議上樣體積≤2.5%CV）分離；若柱效檢測合格后，以1ml/min(30cm/min)的流速用保存液平衡2CV后保存。
5.清洗（以裝填XK 16/70的柱子為例 ）
5.1 用純化水以1ml/min（30cm/h）沖洗2個CV。
5.2 用0.5M NaOH以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.3 用純化水以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.4 用0.5M 乙酸以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。。
5.5 用純化水以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.6 用30%異丙醇以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.7 用純化水以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
5.8 用0.2M醋酸鈉、20%乙醇以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
6.消毒
6.1 用純化水以1ml/min（30cm/h）沖洗2個CV。
6.2 用0.5M NaOH以1ml/min（30cm/h）的流速反向沖洗2個CV。
6.3 用純化水以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
6.4 用0.2M醋酸鈉、20%乙醇以1ml/min（30cm/h）的流速沖洗2個CV。
7.常見問題
表2：常見問題及解決方案
問題 | 可能原因 | 解決方案 |
目標(biāo)峰與雜質(zhì)峰分辨率差 | 1.上樣體積過大 | 降低上樣量至0.5%CV |
2.樣品太粘稠 | 適當(dāng)?shù)南♂寴悠?/span> | |
3.流速太快 | 降低流速 | |
4.柱子太短 | 選擇更長或更細的柱子 | |
5.死體積過大 | 最小化管路和接頭的死體積 | |
6.柱子裝填不佳 | 重新裝柱或使用預(yù)裝柱 | |
7.樣品沒有過濾 | 用0.22um或0.45um過濾樣品 | |
8.介質(zhì)太臟 | 清潔柱子并重新平衡 | |
9.柱子沒有垂直安裝 | 重新裝柱 | |
10.使用溫度不均一 | 推薦維持恒定溫度 | |
沒有預(yù)期的洗脫峰 | 1.上樣量和之前不一致 | 維持同樣的上樣量 |
2.蛋白和介質(zhì)之間有離子作用 | 維持緩沖液中離子強度在0.05-0.15NaCl | |
3.蛋白和介質(zhì)之間有疏水作用 | 降低離子強度可以最小化疏水作用，也可以通過調(diào)高pH、加入去污劑或有機試劑來降低疏水作用 | |
4.樣品在儲存的過程中發(fā)生改變 | 制備新鮮的樣品 | |
5.蛋白和脂類在層析柱中沉淀 | 清洗柱子或更換新的柱子 | |
6.介質(zhì)中有微生物生長 | 柱子使用過程中不會長菌，存放時必須用20%乙醇保存 | |
洗脫峰提前 | 1.裝填的柱子中有間隙 | 重新裝柱 |
2.蛋白形成二聚體或多聚體 | 注意維持樣品在實驗條件下的穩(wěn)定性 | |
洗脫峰延遲 | 1.蛋白和介質(zhì)之間有離子作用或疏水作用。 | 維持緩沖液中離子強度在0.05-0.15NaCl |
2.介質(zhì)、濾膜、柱床頂部很臟 | 清潔柱子并重新平衡 | |
3.介質(zhì)中有微生物生長 | 柱子使用過程中不會長菌，存放時必須用20%乙醇保存 | |
色譜峰上升緩慢 | 介質(zhì)裝填過緊 | 重新裝柱 |
色譜峰拖尾 | 介質(zhì)裝填太松 | 重新裝柱 |
柱床有裂縫或干涸 | 出現(xiàn)泄露或大體積氣泡引入 | 檢查管路是否有泄露或氣泡，重新裝柱 |
液流較慢 | 1.蛋白或脂類聚集 | 及時清洗介質(zhì)或濾膜 |
2.蛋白沉淀在介質(zhì)中 | 調(diào)整洗脫液組分，以維持目標(biāo)物的穩(wěn)定性 | |
3.介質(zhì)中微生物生長 | 柱子使用過程中不會長菌，存放時必須用20%乙醇保存 | |
4.柱床被壓縮 | 重新裝柱 | |
柱床中出現(xiàn)氣泡 | 1.使用過程中出現(xiàn)溫差或管路中有殘留 | 重新裝柱 |
壓力升高 | 1.樣品混濁 | 制備新鮮的樣品 |
2.管路、篩板堵塞 | 清洗管路、篩板、介質(zhì)，重新裝柱 |
8.訂購信息
表3：訂購信息表
產(chǎn)品 | 規(guī)格 | 貨號 |
Focurose 30 PG | 25ml | HN120208025M |
Focurose 30 PG | 100ml | HN120208100M |
Focurose 30 PG | 500ml | HN120208500M |
Focurose 30 PG | 1L | HN120208001L |
Focurose 30 PG | 5L | HN120208005L |
Focurose 30 PG | 20L | HN120208020L |
備注：大規(guī)格包裝產(chǎn)品或其它產(chǎn)品購買，請咨詢本公司當(dāng)?shù)劁N售或售前技術(shù)支持。
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